LTBP-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421482-LAC

Ltbp3 codifica la latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), una glicoproteina della matrice extracellulare che si lega ai complessi latenti di TGF-β e ne regola secrezione, deposito e attivazione nella nicchia pericellulare. Controllando la biodisponibilità del TGF-β, LTBP-3 influenza programmi trascrizionali SMAD-dipendenti che governano il comportamento delle cellule mesenchimali, il rimodellamento della matrice e la definizione dei pattern di sviluppo. Nei sistemi murini, un’alterata attività di Ltbp3 è stata associata a una regolazione anomala dell’omeostasi del tessuto connettivo e a difetti nello sviluppo scheletrico, cranio-facciale e cardiovascolare, a testimonianza del ruolo centrale della segnalazione TGF-β nella morfogenesi. Queste caratteristiche rendono LTBP-3 un nodo utile per studiare il crosstalk tra ECM e fattori di crescita, la meccanotrasduzione e la dinamica della segnalazione in fibroblasti, linee osteogeniche e cellule vascolari.

Le particelle di attivazione lentivirale LTBP-3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ltbp3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LTBP-3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ltbp3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LTBP-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ltbp3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.