LSDP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426297

Übersicht

Perilipin 5 (Plin5), auch bekannt als Lipid-Storage-Droplet-Protein 5 (LSDP5), ist ein mit Lipidtröpfchen assoziiertes Protein, das die intrazelluläre Speicherung von Triacylglycerolen reguliert und den Transport von Fettsäuren zu den Mitochondrien zur β‑Oxidation koordiniert. In oxidativen Geweben der Maus wie Herz, Leber und Skelettmuskel trägt PLIN5 dazu bei, das Gleichgewicht zwischen Lipidsequestrierung und Lipolyse zu wahren, indem es den Zugang von Lipasen zur Tröpfchenoberfläche moduliert und die Mobilisierung von Lipiden an die mitochondriale oxidative Kapazität koppelt. Über diese Funktionen beeinflusst PLIN5 die Energiehomöostase, lipidinduzierte Signalwege sowie zelluläre Antworten auf Nährstoffverfügbarkeit und Fasten. Eine Fehlregulation der mit PLIN5 verknüpften Lipidtröpfchen-Dynamik ist relevant für experimentelle Modelle von Steatose, Insulinresistenz und lipotoxischem Stress, die die mitochondriale Funktion und entzündungsassoziierte metabolische Phänotypen beeinträchtigen.

Das LSDP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Plin5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Plin5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Plin5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LSDP5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Plin5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LSDP5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Plin5-Exone abzielen, die für die LSDP5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Plin5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LSDP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LSDP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Plin5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LSDP5 HDR-Plasmid (m) und LSDP5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Plin5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Plin5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.