Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC50 (h): sc-407107

Présentation

DNAAF1 (LRRC50) code une protéine à répétitions riches en leucine, nécessaire à la pré-assemblage cytoplasmique des bras de dynéine axonémaux, une étape clé de la biogenèse des cils motiles. Elle favorise la maturation et le trafic des complexes moteurs de dynéine avant leur incorporation dans l’axonème, régulant ainsi le battement ciliaire et la clairance mucociliaire. Une altération de DNAAF1 perturbe la formation des bras de dynéine externes et internes et compromet l’écoulement des fluides généré par les cils. Des variants pathogènes sont associés à la dyskinésie ciliaire primitive avec des défauts de latéralité, faisant de DNAAF1 une cible pertinente pour l’étude des ciliopathies et des programmes de développement dépendants des cils.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC50 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAAF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAAF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAAF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRRC50.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAAF1 pour l'étude de la signalisation de LRRC50, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNAAF1 essentiels à la fonction de LRRC50
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAAF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRRC50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRRC50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAAF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRRC50 plasmide HDR (h) et le LRRC50 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAAF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAAF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.