Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRP1: sc-400638-ACT

LRP1 (low-density lipoprotein receptor–related protein 1) est un récepteur endocytaire et de signalisation multifonctionnel qui se lie à divers ligands, notamment des lipoprotéines contenant l’apolipoprotéine E, des complexes α2‑macroglobuline–protéase et des facteurs associés à la matrice extracellulaire. Il régule la capture et le trafic médiés par les récepteurs, contrôle l’élimination extracellulaire des protéases et coordonne la signalisation via des voies telles que MAPK/ERK, PI3K/AKT et TGF‑β, de manière dépendante du type cellulaire. Le LRP1 humain influence la gestion des lipides, la migration cellulaire et l’homéostasie vasculaire, et a également été impliqué en neurobiologie par son rôle dans le transport de l’amyloïde‑β et la régulation synaptique. Une expression ou une fonction altérée de LRP1 est associée à des traits cardiométaboliques, à des processus liés à l’athérosclérose, ainsi qu’à des mécanismes pertinents pour les maladies neurodégénératives et le cancer, impliquant le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation des facteurs de croissance.

LRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.