LPAAT-η CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406893

概要

LPCAT4はリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ4（LPAAT-η）をコードしており、膜関連型のアシルトランスフェラーゼとして、リゾリン脂質を再アシル化してホスファチジルコリンおよび関連するグリセロリン脂質を生成します。リン脂質リモデリングを制御することにより、LPAAT-ηは膜組成、細胞小器官の恒常性、ならびに小胞輸送やストレス応答に影響する脂質依存的シグナル伝達過程に寄与します。LPCAT4の活性はLandsサイクルおよびより広範なグリセロリン脂質代謝と交差し、受容体シグナルや炎症経路を調節する脂質種の利用可能性に影響を与えます。リン脂質リモデリングの破綻は代謝および増殖に関わる表現型と関連づけられており、LPCAT4は、がん生物学、心代謝疾患モデル、炎症関連の細胞状態に関わる脂質駆動メカニズムを研究するうえで有用な標的となります。

LPAAT-η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLPCAT4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LPCAT4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LPCAT4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LPAAT-ηタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LPAAT-ηシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LPCAT4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LPAAT-ηの機能に不可欠なLPCAT4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LPCAT4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LPAAT-η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLPAAT-η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LPCAT4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LPAAT-η HDRプラスミド（h）および LPAAT-η HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLPCAT4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLPCAT4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。