Plasmide CRISPR/Cas9 KO LPAAT-η (h): sc-406893

Présentation

LPCAT4 code la lysophosphatidylcholine acyltransférase 4 (LPAAT-η), une acyltransférase associée aux membranes qui catalyse la réacylation des lysophospholipides afin de produire la phosphatidylcholine et des glycérophospholipides apparentés. En contrôlant le remodelage des phospholipides, LPAAT-η contribue à la composition membranaire, à l’homéostasie des organites et à des processus de signalisation dépendants des lipides qui influencent le trafic vésiculaire et les réponses au stress. L’activité de LPCAT4 s’inscrit dans le cycle de Lands et, plus largement, dans le métabolisme des glycérophospholipides, en modifiant la disponibilité d’espèces lipidiques qui régulent la signalisation des récepteurs et les voies inflammatoires. Un remodelage phospholipidique dérégulé a été associé à des phénotypes métaboliques et prolifératifs, faisant de LPCAT4 une cible utile pour étudier des mécanismes induits par les lipides pertinents pour la biologie du cancer, les modèles de maladies cardiométaboliques et les états cellulaires associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LPAAT-η (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LPCAT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LPCAT4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LPCAT4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LPAAT-η.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LPCAT4 pour l'étude de la signalisation de LPAAT-η, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LPCAT4 essentiels à la fonction de LPAAT-η
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LPCAT4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LPAAT-η plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LPAAT-η plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LPCAT4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LPAAT-η plasmide HDR (h) et le LPAAT-η (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LPCAT4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LPCAT4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.