Plasmide CRISPR/Cas9 KO LPAAT-α (h): sc-406544

Présentation

AGPAT1 code la lysophosphatidic acid acyltransferase alpha (LPAAT-α), une acyltransférase associée au réticulum endoplasmique qui convertit l’acide lysophosphatidique en acide phosphatidique, un intermédiaire central de la biosynthèse des glycérophospholipides et des triacylglycérols. En régulant les réserves d’acide phosphatidique, la LPAAT-α influence la biogenèse membranaire, la formation des gouttelettes lipidiques et la signalisation lipidique en aval, qui affecte la dynamique des organites et les réponses cellulaires au stress. Une perturbation de l’activité d’AGPAT1 peut modifier la composition des phospholipides et les flux métaboliques, reliant cette enzyme à des voies impliquées dans l’homéostasie lipidique et l’équilibre énergétique. Un métabolisme des glycérolipides dérégulé impliquant AGPAT1 a été étudié dans le contexte de phénotypes métaboliques et neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des processus cellulaires pilotés par les lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LPAAT-α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AGPAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AGPAT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AGPAT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LPAAT-α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AGPAT1 pour l'étude de la signalisation de LPAAT-α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AGPAT1 essentiels à la fonction de LPAAT-α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AGPAT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LPAAT-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LPAAT-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AGPAT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LPAAT-α plasmide HDR (h) et le LPAAT-α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AGPAT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AGPAT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.