LOX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421456

Übersicht

Maus-Lox kodiert die Lysyloxidase (LOX), eine sekretierte, kupferabhängige Aminoxidase, die die kovalente Quervernetzung von Kollagen und Elastin katalysiert und dadurch die Reifung der extrazellulären Matrix (ECM) sowie die biomechanische Gewebeintegrität steuert. Die LOX-Aktivität prägt das ECM-Remodeling, reguliert Zell–Matrix-Adhäsion und -Migration und beeinflusst Signalnetzwerke, die mit Fibrose und Mechanotransduktion verknüpft sind, darunter Integrin/FAK und nachgeschaltete MAPK-Signalwege. Eine fehlregulierte LOX-Expression oder -Aktivität wird mit einer aberranten Versteifung und einem veränderten Remodeling der Matrix in Verbindung gebracht, wie sie bei fibrotischen Erkrankungen, vaskulären Pathologien und tumorassoziierten stromalen Veränderungen zu beobachten sind, wodurch Lox einen nützlichen Ansatzpunkt zur Untersuchung mikroenvironmentgetriebener Phänotypen darstellt.

Das LOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lox-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lox-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lox nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LOX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lox-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LOX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lox-Exone abzielen, die für die LOX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lox-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LOX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lox-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LOX HDR-Plasmid (m) und LOX HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lox-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lox-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.