LONP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-428748-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LONP1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LONP1ダブルニカースプラスミド（m）およびLONP1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Lonp1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LONP1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-428748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LONP1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-428748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lonp1は、ミトコンドリア・マトリックスに局在するATP依存性のセリンプロテアーゼ／シャペロンであるLONP1をコードし、損傷したタンパク質、ミスフォールドタンパク質、酸化タンパク質を再フォールディングまたは分解することで、ミトコンドリアのプロテオスタシスを制御する。呼吸鎖構成要素や調節因子のターンオーバーを制御することにより、LONP1は酸化的リン酸化、ミトコンドリアDNAの維持、ならびにミトコンドリア・アンフォールドタンパク質応答（mtUPR）などのストレス適応プログラムを支える。LONP1機能が障害されると、ミトコンドリア動態が乱れ、活性酸素種が増加し、エネルギー恒常性が損なわれるため、この経路は神経変性、心血管・代謝ストレス、がんに伴う代謝リモデリングに関連するミトコンドリア機能不全の表現型と結び付く。したがって、マウスLonp1は、ミトコンドリアにおけるプロテアーゼ分解、ATP依存的リモデリング、レドックスシグナル伝達を統合する品質管理機構を研究するうえでの重要な結節点である。
LONP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lonp1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lonp1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lonp1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lonp1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。