LOC100653515 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418910

Übersicht

CEP295NL (LOC100653515) ist ein menschliches Gen, das als CEP295-ähnlicher Lokus annotiert ist, und es wird aufgrund der Homologie zu Mitgliedern der CEP295-Familie, die an der Zentriolenbiogenese und der Centrosomenreifung beteiligt sind, mit centrosomenassoziierter Biologie in Verbindung gebracht. Proteine in diesem Funktionsbereich tragen zur Organisation der Mikrotubuli, zur Spindelassemblierung und zur zuverlässigen Chromosomensegregation während der Mitose bei und beeinflussen damit den Zellzyklusverlauf und die Genomstabilität. Eine Fehlregulation der Centrosomenstruktur oder der Centrosomenkopienzahl ist häufig mit Aneuploidie und zellulären Stressphänotypen verknüpft, was die Untersuchung von CEP295NL in proliferativen Kontexten begründet. Die Charakterisierung von LOC100653515 kann dazu beitragen zu klären, wie centrosomengekoppelte Prozesse mit Checkpoints und Signalwegen des Zytoskelett-Remodelings zusammenwirken.

Das LOC100653515 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CEP295NL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CEP295NL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CEP295NL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LOC100653515-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CEP295NL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LOC100653515-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CEP295NL-Exone abzielen, die für die LOC100653515-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CEP295NL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LOC100653515 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LOC100653515 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CEP295NL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LOC100653515 HDR-Plasmid (h) und LOC100653515 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CEP295NL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CEP295NL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.