Plasmide Double Nickase (m) LMP7: sc-421450-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) LMP7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LMP7 Double Nickase (m) et le plasmide LMP7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Psmb8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LMP7 Antibody (D-2): sc-374089
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) LMP7 | sc-421450-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) LMP7 | sc-421450-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Psmb8 code la sous-unité catalytique de l’immunoprotéasome LMP7 (β5i), une protéase spécialisée qui remplace des composants du protéasome constitutif en réponse à des signaux inflammatoires tels que la signalisation par les interférons. LMP7 module la protéolyse de la voie ubiquitine–protéasome et façonne le répertoire de peptides générés pour la présentation antigénique par le CMH de classe I, influençant la surveillance immunitaire adaptative. Dans les cellules immunitaires de souris, l’activité de l’immunoprotéasome contribue à la protéostasie en situation de stress oxydatif ou inflammatoire et affecte des programmes inflammatoires associés à NF-κB. Une altération de la fonction de PSMB8/LMP7 a été associée à une dérégulation du traitement des antigènes et à des phénotypes inflammatoires, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et de l’immunopathologie.
LMP7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Psmb8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Psmb8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Psmb8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Psmb8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.