LMP7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421450-ACT

Psmb8 codifica, no camundongo, a subunidade catalítica do imunoproteassoma LMP7 (β5i), um componente-chave do proteassoma 20S induzível por IFN-γ, que remodela a especificidade proteolítica durante a inflamação. A LMP7 promove a geração de peptídeos para MHC classe I e sustenta o processamento e a apresentação de antígenos, conectando a proteostase à vigilância imune adaptativa. Ao influenciar programas inflamatórios associados ao NF-κB e as respostas celulares ao estresse por citocinas, a atividade de Psmb8 impacta a diferenciação de células imunes e seus estados de ativação. A desregulação da função do imunoproteassoma tem sido associada a apresentação antigênica aberrante e a fenótipos inflamatórios crônicos, tornando Psmb8 um alvo relevante para pesquisas em imunologia e proteostase em modelos murinos.

LMP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Psmb8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LMP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Psmb8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Psmb8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LMP7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Psmb8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LMP7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LMP7 em células tumorais com expressão de Psmb8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.