Plasmide CRISPR/Cas9 KO LKB1 (h): sc-400313

Présentation

STK11 code la sérine/thréonine kinase LKB1, un régulateur majeur de l’homéostasie énergétique et de la polarité cellulaires via la phosphorylation d’AMPK et de kinases apparentées de la famille AMPK. En intégrant les signaux liés aux nutriments et au stress, LKB1 module la signalisation mTOR, l’autophagie, le métabolisme mitochondrial et le contrôle du cycle cellulaire, et contribue à l’organisation épithéliale par l’intermédiaire des complexes de polarité. La perturbation de la signalisation dépendante de LKB1 est associée à une adaptation métabolique altérée, une polarité compromise et des réponses au stress génomique. STK11 est fréquemment étudié en biologie du cancer et dans les contextes de prédisposition héréditaire aux tumeurs, où la perte de fonction de LKB1 remodèle le contrôle de la croissance et les voies métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LKB1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STK11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STK11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STK11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LKB1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STK11 pour l'étude de la signalisation de LKB1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STK11 essentiels à la fonction de LKB1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STK11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LKB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LKB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STK11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LKB1 plasmide HDR (h) et le LKB1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STK11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STK11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.