Plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (m): sc-419592

Présentation

Cdh17 code la LI-cadhérine, une molécule d’adhésion cellule–cellule dépendante du calcium appartenant à la superfamille des cadhérines, qui contribue à la cohésion et à la polarité épithéliales dans les tissus gastro-intestinaux et hépatobiliaires. Grâce à une adhésion homophile à la surface cellulaire, la LI-cadhérine aide à organiser l’architecture des jonctions, régule l’intégrité de la barrière et influence le contrôle, dépendant du contact, de la migration et de la différenciation cellulaires. Des altérations de l’adhésion médiée par les cadhérines sont associées au remodelage épithélial, à la dysplasie et à des phénotypes liés à l’invasion, faisant de Cdh17 un point d’entrée utile pour étudier la stabilité des jonctions lors de l’inflammation et de la progression associée aux tumeurs chez la souris. Son profil d’expression et sa fonction d’adhésion soutiennent également son utilisation comme cible associée à un marqueur dans les études portant sur l’identité des lignages épithéliaux et l’organisation tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LI-cadherin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdh17 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdh17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdh17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LI-cadherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdh17 pour l'étude de la signalisation de LI-cadherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cdh17 essentiels à la fonction de LI-cadherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdh17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LI-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LI-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdh17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LI-cadherin plasmide HDR (m) et le LI-cadherin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdh17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdh17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.