LHX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401071

Übersicht

LHX2 (LIM-Homeobox 2) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit LIM-Domäne, der während der Entwicklung die Festlegung von Zelllinien und die Gewebemusterbildung reguliert und dabei eine zentrale Rolle bei der Aufrechterhaltung neuraler Vorläuferzellen, der Arealisierung des Kortex sowie der Morphogenese von Haarfollikeln spielt. Durch die Bindung von LIM-Kofaktoren und sequenzspezifischen DNA-Elementen koordiniert LHX2 Transkriptionsprogramme, die mit Zellschicksalsentscheidungen, dem Timing der Differenzierung und morphogen-abhängigen Signalnetzwerken wie der WNT- und SHH-abhängigen Musterbildung verknüpft sind. Eine fehlregulierte LHX2-Aktivität wurde mit veränderten neuroentwicklungsbezogenen Verläufen sowie mit aberranten Transkriptionszuständen in mehreren Krebszusammenhängen in Verbindung gebracht. Als nuklearer Regulator stellt LHX2 einen hilfreichen Knotenpunkt dar, um genregulatorische Schaltkreise zu analysieren, die Entwicklungsprogramme mit Proliferations- und Differenzierungsphänotypen in humanen Zellen koppeln.

Das LHX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LHX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LHX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LHX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LHX2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LHX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LHX2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LHX2-Exone abzielen, die für die LHX2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LHX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LHX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LHX2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LHX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LHX2 HDR-Plasmid (h) und LHX2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LHX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LHX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.