Plásmido Doble Nickase (h) LGR5: sc-400726-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LGR5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LGR5 (h) y el plásmido de doble nickasa LGR5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LGR5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LGR5 Anticuerpo (634J2E): sc-517661
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LGR5 | sc-400726-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LGR5 | sc-400726-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LGR5 (receptor acoplado a proteína G 5 que contiene repeticiones ricas en leucina) es un receptor de superficie celular sensible a WNT/β-catenina, ampliamente utilizado como marcador de poblaciones de células madre adultas y progenitoras en tejidos epiteliales. En conjunto con las R-spondinas y los receptores Frizzled/LRP, LGR5 potencia la señalización canónica de WNT para regular la autorrenovación, la homeostasis cripta–vellosidad y el compromiso de linaje. La desregulación de la señalización asociada a LGR5 se ha relacionado con estados alterados tipo célula madre, proliferación aberrante y cambios en los programas de diferenciación observados en múltiples contextos de tumores sólidos. Estas propiedades hacen de LGR5 una diana útil para diseccionar la dinámica de las células madre, la señalización del nicho y la modulación de la vía WNT en modelos celulares humanos.
LGR5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LGR5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LGR5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LGR5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LGR5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.