Plasmide CRISPR d'Activation (m) LEREPO4: sc-427290-ACT

Le gène murin Zc3h15 code la protéine LEREPO4, un facteur de liaison à l’ARN de type doigt de zinc CCCH impliqué dans la régulation post‑transcriptionnelle des gènes, notamment la stabilité des ARNm et le contrôle de la traduction. En modulant la maturation et le renouvellement des ARN, Zc3h15 peut influer sur les réponses de signalisation en aval des programmes d’immunité innée et de réponse au stress, qui reposent sur un remodelage rapide des transcrits. Une activité altérée des protéines de liaison à l’ARN à doigts de zinc CCCH est souvent associée à une expression dérégulée des cytokines, à l’adaptation au stress cellulaire et à une prolifération anormale, faisant de Zc3h15 un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation centrée sur l’ARN. Dans les modèles de recherche biomédicale, la perturbation de Zc3h15 aide à disséquer des voies impliquées dans l’inflammation, la régulation hématopoïétique et d’autres contextes où les décisions de destin des ARN façonnent le phénotype.

LEREPO4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zc3h15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LEREPO4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zc3h15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zc3h15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LEREPO4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zc3h15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LEREPO4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LEREPO4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Zc3h15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.