LEPROT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406321

Descripción general

LEPROT (transcrito superpuesto del receptor de leptina), también conocido como endospanina-1, es una proteína de membrana endosomal que modula el tráfico y la abundancia en la superficie celular de receptores de citocinas, con efectos destacados sobre LEPR y complejos de señalización relacionados. Al regular la internalización y el reciclaje de receptores, LEPROT puede influir en la salida de la vía de señalización JAK/STAT y, de forma más amplia, en el control de la transducción de señales en proximidad a la membrana. La alteración de la expresión de LEPROT se ha vinculado a fenotipos metabólicos a través de sus efectos sobre la respuesta a la leptina y la homeostasis energética. Su papel en la clasificación de receptores también la hace relevante para estudios de señalización asociada a la inflamación y del recambio desregulado de receptores en contextos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LEPROT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LEPROT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LEPROT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LEPROT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LEPROT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LEPROT para la investigación de la señalización de LEPROT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LEPROT críticos para la función de LEPROT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LEPROT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LEPROT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LEPROT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LEPROT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LEPROT (h) y el plásmido HDR LEPROT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LEPROT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LEPROT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.