Plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-B (h): sc-416429

Présentation

LDHB code la sous-unité LDH‑B de la lactate déshydrogénase, une enzyme cytosolique clé qui catalyse l’interconversion du lactate et du pyruvate, avec le cycle concomitant NADH/NAD⁺. En régulant l’utilisation du pyruvate et l’élimination du lactate, la LDH‑B aide à coordonner la glycolyse, le métabolisme oxydatif mitochondrial et l’homéostasie rédox, influençant la production d’énergie dans des conditions variables d’oxygène et de nutriments. L’activité de LDHB contribue à la reprogrammation métabolique lors du stress cellulaire et de la différenciation, et un déséquilibre des isoenzymes de la LDH a été associé à des phénotypes liés aux réponses à l’hypoxie et à un métabolisme prolifératif dans divers contextes pertinents pour les maladies. En tant que nœud métabolique, la LDH‑B est fréquemment étudiée aux côtés des points de contrôle de la glycolyse, de la fonction mitochondriale et de la signalisation par le lactate dans des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LDHB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LDHB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LDHB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LDH-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LDHB pour l'étude de la signalisation de LDH-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LDHB essentiels à la fonction de LDH-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LDHB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LDH-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LDH-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LDHB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LDH-B plasmide HDR (h) et le LDH-B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LDHB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LDHB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.