Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
LDH-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416429
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LDH-B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico LDH-B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LDH-B Antibody (431.1): sc-100775
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LDH-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-416429 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
LDHB codifica la subunità LDH-B della lattato deidrogenasi, un enzima citosolico chiave che catalizza l’interconversione tra lattato e piruvato con il concomitante ciclo NADH/NAD⁺. Regolando l’utilizzo del piruvato e la rimozione del lattato, LDH-B contribuisce a coordinare la glicolisi, il metabolismo ossidativo mitocondriale e l’omeostasi redox, influenzando la produzione di energia in condizioni variabili di ossigeno e nutrienti. L’attività di LDHB partecipa alla riprogrammazione metabolica durante lo stress cellulare e la differenziazione, e un’alterata bilancia delle isoforme della LDH è stata collegata a fenotipi associati alle risposte all’ipossia e a un metabolismo proliferativo in diversi contesti rilevanti per le malattie. In quanto nodo metabolico, LDH-B è spesso analizzata insieme ai punti di controllo della glicolisi, alla funzione mitocondriale e alla segnalazione mediata dal lattato negli studi meccanicistici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LDH-B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LDHB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LDHB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LDHB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LDH-B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LDHB per lo studio della segnalazione di LDH-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni LDHB critici per la funzione di LDH-B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LDHB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal LDH-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LDH-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LDHB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal LDH-B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LDH-B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LDHB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LDHB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.