LAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401281

概要

T細胞活性化リンカー（LAT）は膜貫通型のアダプタータンパク質であり、T細胞受容体（TCR）の刺激後に下流でチロシンリン酸化され、多タンパク質からなるシグナル伝達複合体の足場として機能します。LATはGRB2、GADS、PLCγ1、SOSのリクルートを統合して、カルシウムフラックス、Ras–MAPK/ERK、NFAT/NF-κB経路を介したシグナル伝達を促進し、T細胞の活性化、サイトカイン産生、免疫シナプスの形成・組織化を規定します。ヒト細胞では、LAT依存的なシグナル統合の変調は免疫調節異常の研究と関連しており、自己免疫、免疫不全様の表現型、リンパ球の異常な活性化プログラムに寄与する機序の解明に重要です。LATは近位TCRシグナル伝達の要所に位置するため、適応免疫における経路の配線、フィードバック制御、シグナルの強度と持続時間の符号化を解析するための標的として広く用いられています。

LAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLAT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LAT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LATのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LATタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LATシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LAT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LATの機能に不可欠なLATエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LATゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LAT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LAT HDRプラスミド（h）および LAT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLATホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLAT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。