LAMP-2 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421383-LAC

Lamp2 kodiert das lysosomenassoziierte Membranglykoprotein 2 (LAMP‑2), einen Hauptbestandteil der Lysosomenbegrenzungsmembran, der die Integrität der Lysosomen und den Membrantransport unterstützt. LAMP‑2 ist zentral für Autophagie‑Lysosom‑Signalwege, einschließlich der chaperon‑vermittelten Autophagie und der Fusion von Autophagosomen mit Lysosomen, und beeinflusst dadurch die Proteinkontrolle (Proteinqualitätskontrolle), den Turnover von Organellen und zelluläre Stressantworten. Eine veränderte LAMP‑2‑Aktivität stört die Lysosomenfunktion und den autophagischen Fluss – Prozesse, die mit der Homöostase von Kardiomyozyten, der Erhaltung der Skelettmuskulatur und neurodegenerativen Mechanismen in Verbindung stehen. In Mausmodellen wird Lamp2 häufig eingesetzt, um die Lysosomenbiologie, den Immunmetabolismus und die zellulären Folgen einer gestörten Makromolekül‑Beseitigung zu untersuchen.

LAMP-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Lamp2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LAMP-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Lamp2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LAMP-2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Lamp2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.