LAMP-2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421383-ACT

マウスのLamp2は、リソソーム関連膜タンパク質2（LAMP-2）をコードします。LAMP-2は高度に糖鎖修飾されたI型膜タンパク質で、リソソームの限界膜に豊富に存在し、リソソームの完全性の維持や基質の分解・更新（ターンオーバー）を支えます。LAMP-2は、オートファゴソームとリソソームの融合やシャペロン介在性オートファジーを含むオートファジー—リソソーム経路に関与し、その結果としてオルガネラの品質管理、プロテオスタシス、細胞ストレス応答に影響を及ぼします。LAMP-2機能の変化は、リソソーム蓄積症様の表現型やオートファジーフラックスの低下と関連し、これらの過程は心筋症、ミオパチー、神経変性のモデルで示唆されています。リソソーム恒常性の中核因子として、Lamp2はエンドリソソーム輸送、ミトコンドリア品質管理、免疫細胞における抗原プロセシングなどの文脈で頻繁に研究されています。

LAMP-2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Lamp2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LAMP-2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Lamp2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLamp2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LAMP-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLamp2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLAMP-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLamp2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLAMP-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。