KV3.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406541

概要

KCNC1 は電位依存性カリウムチャネルサブユニット KV3.1 をコードしており、これは速やかに活性化し、かつ迅速に不活性化する K⁺ コンダクタンスとして、興奮性細胞における短い活動電位と高頻度発火を支えます。KV3.1 は膜の再分極と発火の精度を形作り、神経の興奮性調節を介してネットワーク振動やシナプスのタイミングに影響を与えます。KCNC1 の活性は、カルシウム流入、神経伝達物質放出確率、スパイク頻度適応を協調的に制御する、より広範なイオンチャネルシグナル伝達過程とも交差します。KCNC1 の遺伝的変異や制御異常は、興奮性の変化を伴う神経学的表現型と関連づけられており、チャネル病や回路機能障害の機序研究において重要です。

KV3.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KV3.1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KV3.1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KV3.1の機能に不可欠なKCNC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KV3.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKV3.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KV3.1 HDRプラスミド（h）および KV3.1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。