Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV3.1 (h): sc-406541

Présentation

KCNC1 code pour la sous-unité de canal potassique voltage‑dépendant KV3.1, une conductance K⁺ à activation rapide et à désactivation tout aussi rapide, qui favorise des potentiels d’action brefs et une décharge à haute fréquence dans les cellules excitables. KV3.1 façonne la repolarisation membranaire et la précision de la décharge, influençant les oscillations des réseaux et le timing synaptique via la régulation de l’excitabilité neuronale. L’activité de KCNC1 s’inscrit à l’interface de processus plus larges de signalisation des canaux ioniques qui coordonnent l’influx de calcium, la probabilité de libération des neurotransmetteurs et l’adaptation de la fréquence de décharge. Des variations génétiques ou une dysrégulation de KCNC1 ont été associées à des phénotypes neurologiques impliquant une excitabilité altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des canalopathies et des dysfonctionnements des circuits.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV3.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV3.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNC1 pour l'étude de la signalisation de KV3.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNC1 essentiels à la fonction de KV3.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KV3.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KV3.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KV3.1 plasmide HDR (h) et le KV3.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.