Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.5 (h): sc-404341

Présentation

KCNA5 code la sous-unité humaine du canal potassique voltage‑dépendant KV1.5, un canal K+ de type rectificateur retardé qui conduit le courant rectificateur retardé ultra‑rapide (IKur) et façonne la repolarisation membranaire ainsi que l’excitabilité. L’activité de KV1.5 influence la durée du potentiel d’action, les propriétés réfractaires et la signalisation dépendante du Ca2+ en contrôlant le potentiel de membrane dans les cellules électriquement actives, ce qui l’inscrit dans des voies plus larges d’homéostasie ionique et de remodelage électrophysiologique. Une expression altérée de KCNA5 ou une fonction canalaires modifiée a été associée à des changements de l’électrophysiologie atriale et à des phénotypes liés aux arythmies, et le gène est également étudié dans des contextes où les flux de K+ modulent la prolifération et la migration. Ainsi, KCNA5 est fréquemment investigué dans les mécanismes de remodelage atrial, les canalopathies et les réseaux de signalisation sensibles à la dynamique du potentiel de membrane.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNA5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNA5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV1.5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNA5 pour l'étude de la signalisation de KV1.5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNA5 essentiels à la fonction de KV1.5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNA5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KV1.5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KV1.5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNA5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KV1.5 plasmide HDR (h) et le KV1.5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNA5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNA5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.