Ksr-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401768

Descripción general

KSR1 codifica el supresor de la quinasa de Ras 1 (Ksr-1), una proteína de andamiaje que organiza los componentes de la cascada RAF–MEK–ERK/MAPK para modular la amplitud, la duración y la localización subcelular de la señal. Al coordinar el ensamblaje del módulo MAPK aguas abajo de los receptores tirosina cinasa y de RAS, Ksr-1 contribuye a la regulación de las decisiones de proliferación, diferenciación y supervivencia. La actividad y la expresión de KSR1 se han vinculado con una salida alterada de la vía MAPK en contextos de señalización oncogénica, y también se ha implicado en redes de señalización inmunitaria e inflamatoria que convergen con programas transcripcionales dependientes de ERK. Estas características hacen de KSR1 un nodo útil para desentrañar el cableado de la vía, el control por retroalimentación y la propagación de señales específica del contexto en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ksr-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KSR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KSR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KSR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ksr-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KSR1 para la investigación de la señalización de Ksr-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KSR1 críticos para la función de Ksr-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KSR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ksr-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ksr-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KSR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ksr-1 (h) y el plásmido HDR Ksr-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KSR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KSR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.