Plásmido CRISPR de Activación (h) KMO: sc-418366-ACT

La KMO humana (quinurenina 3-monooxigenasa) es una enzima mitocondrial dependiente de flavina de la vía de la quinurenina del catabolismo del triptófano, que cataliza la conversión de L-quinurenina en 3-hidroxiquinurenina. Al controlar el flujo hacia metabolitos posteriores como el ácido 3-hidroxiantranílico y el ácido quinolínico, la KMO influye en el equilibrio redox celular, la biosíntesis de NAD+ y la señalización neuroinmunitaria. La alteración de la actividad de la KMO puede modificar los niveles de metabolitos neuroactivos y oxidativos, vinculando esta vía con procesos asociados a la inflamación y con mecanismos de enfermedades neurológicas. La expresión de la KMO también se estudia en contextos de estrés metabólico y regulación inmunitaria, donde la remodelación de la vía de la quinurenina afecta las transiciones de estado celular.

KMO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KMO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KMO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KMO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KMO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KMO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KMO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KMO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KMO en células tumorales con expresión de KMO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.