KLF3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402926-ACT

KLF3（Krüppel-like factor 3）は、GC 含量の高い調節配列に結合するジンクフィンガー型転写因子であり、赤血球系の成熟、脂肪細胞分化（アディポジェネシス）、およびより広範な造血系譜の選択を制御する遺伝子発現プログラムを統合的に調節します。KLF3 はコリギュレーター複合体との相互作用を介して、主として状況依存的な転写抑制因子として機能し、クロマチン状態を調節するとともに、RNA ポリメラーゼ II 依存的な転写出力に影響を与えます。KLF3 に連なるネットワークは、代謝および免疫の制御経路とも交差しており、赤血球膜やグロビン関連遺伝子のモジュール、さらに炎症性の転写回路などを含みます。KLF3 活性の破綻は、血液疾患および代謝疾患に関する研究で観察される分化状態の変化や転写プログラムの組み替え（リワイヤリング）と関連づけられており、細胞同一性と遺伝子制御回路の機構研究における有用な標的となっています。

KLF3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KLF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KLF3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KLF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKLF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KLF3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKLF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKLF3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKLF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKLF3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。