KIR6.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401477

Descripción general

KCNJ8 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador entrante KIR6.1 (Kir6.1), un componente central de los canales de potasio sensibles al ATP (KATP) que acoplan el estado metabólico celular a la excitabilidad de la membrana. En muchos tejidos, Kir6.1 se asocia con subunidades del receptor de sulfonilureas para regular el flujo de potasio en respuesta a cambios en la relación ATP/ADP, influyendo en el tono del músculo liso vascular, las respuestas al estrés celular y la señalización dependiente de la excitabilidad. Al vincular la detección de nucleótidos con la conductancia iónica, KIR6.1 contribuye a procesos como la estabilización del potencial de membrana, el manejo del calcio y la homeostasis bioenergética. Las alteraciones genéticas y funcionales de KCNJ8 se han asociado con canalopatías y fenotipos cardiovasculares, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos en células excitables y en contextos de señalización metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR6.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNJ8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNJ8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNJ8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR6.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNJ8 para la investigación de la señalización de KIR6.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNJ8 críticos para la función de KIR6.1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNJ8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIR6.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIR6.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNJ8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR6.1 (h) y el plásmido HDR KIR6.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNJ8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNJ8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.