Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (m): sc-421231

Présentation

Kcnj10 code pour le canal potassique rectifiant entrant KIR4.1, un régulateur clé du tamponnement du K⁺ et du potentiel de membrane dans les cellules gliales et d’autres types cellulaires exprimant KIR4.1 chez la souris. En contrôlant l’homéostasie du potassium extracellulaire et en couplant l’équilibre ionique au transport de l’eau, KIR4.1 soutient l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et l’osmorégulation tissulaire, avec des liens fonctionnels à l’activité de la Na⁺/K⁺-ATPase et à la redistribution spatiale du K⁺ médiée par les astrocytes. Une perturbation de la fonction de KIR4.1 a été associée à une signalisation neurogliale anormale, à une susceptibilité modifiée aux crises et à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques plus larges, faisant de Kcnj10 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des canaux ioniques et de la physiologie gliale. En contexte expérimental, KIR4.1 est également utilisé pour étudier comment la conductance potassique influence le métabolisme cellulaire, l’activité des réseaux et les réponses aux lésions ou à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kcnj10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kcnj10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kcnj10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIR4.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kcnj10 pour l'étude de la signalisation de KIR4.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kcnj10 essentiels à la fonction de KIR4.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kcnj10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIR4.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KIR4.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kcnj10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIR4.1 plasmide HDR (m) et le KIR4.1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kcnj10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kcnj10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.