Particules Lentivirales d'Activation (h) KIF2C: sc-404645-LAC

KIF2C (également connu sous le nom de MCAK) code une dépolymérase des microtubules de la famille des kinésines-13 qui régule la dynamique des extrémités « plus » des microtubules pendant la mitose. En contrôlant les attaches kinétochore–microtubule, l’assemblage du fuseau et la congrégation des chromosomes, KIF2C contribue à assurer une ségrégation chromosomique correcte et la fidélité de la mitose. Son activité s’articule avec les processus du cycle cellulaire et du point de contrôle du fuseau, et elle est fonctionnellement liée à des voies impliquées dans la stabilité du génome. Une expression ou une fonction dérégulée de KIF2C est fréquemment étudiée dans le contexte de l’instabilité chromosomique et de la biologie des maladies prolifératives, où une dynamique des microtubules altérée peut contribuer à des phénotypes associés à l’aneuploïdie.

Les particules d'activation lentivirales KIF2C (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KIF2C dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales KIF2C (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KIF2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de KIF2C. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KIF2C ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.