Keratin 24 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414948

Übersicht

KRT24 kodiert Keratin 24, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das zum Zytoskelettnetzwerk in Epithelzellen beiträgt und gewebespezifische strukturelle Integrität sowie mechanische Belastbarkeit unterstützt. Als Teil der Assemblierung und des Umbaus von Keratinfilamenten ist KRT24 in umfassendere, mit Zytoskelett und Zelladhäsion verknüpfte Prozesse eingebunden, die Zellform, Polarität und Barrierefunktion beeinflussen. Veränderte Muster der Keratinexpression sind häufig mit epithelialen Stressantworten und Veränderungen des Differenzierungszustands assoziiert, wodurch KRT24 ein nützlicher Marker und ein mechanistischer Ansatzpunkt für die Untersuchung epithelialen Remodelings in krankheitsrelevanten Kontexten ist. Eine dysregulierte Organisation von Intermediärfilamenten kann Signalweg-Crosstalk und zelluläre Homöostase beeinträchtigen, was eine Untersuchung von KRT24 in Modellen epithelialer Dysfunktion begründet.

Das Keratin 24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KRT24-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KRT24-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KRT24 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Keratin 24-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KRT24-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Keratin 24-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KRT24-Exone abzielen, die für die Keratin 24-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KRT24-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Keratin 24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Keratin 24 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KRT24-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Keratin 24 HDR-Plasmid (h) und Keratin 24 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KRT24-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KRT24-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.