KCTD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412124

Descripción general

KCTD3 (dominio de tetramerización de canales de potasio que contiene 3) codifica una proteína con dominio BTB/POZ implicada en interacciones proteína–proteína que pueden moldear el ensamblaje de complejos multiproteicos e influir en la proteostasis. Los miembros de la familia KCTD se relacionan con frecuencia con la biología de ligasas de ubiquitina asociadas a cullina-3 (CUL3) y con la regulación de intermediarios de señalización mediante su recambio dirigido, lo que sugiere funciones en el ajuste fino de las vías y la homeostasis celular. A través de estas redes de interacción, KCTD3 es relevante para estudios sobre el control del crecimiento celular, las respuestas al estrés y programas asociados a la diferenciación en los que la remodelación dependiente de la ubiquitinación es prominente. La desregulación de complejos centrados en BTB/KCTD se ha asociado con fenotipos relevantes para enfermedades en cáncer y neurobiología, lo que respalda la investigación de KCTD3 en modelos mecanísticos de señalización alterada y control de calidad proteica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KCTD3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCTD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCTD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCTD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KCTD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCTD3 para la investigación de la señalización de KCTD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCTD3 críticos para la función de KCTD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCTD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KCTD3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KCTD3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCTD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KCTD3 (h) y el plásmido HDR KCTD3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCTD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCTD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.