Junctophilin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409301

Übersicht

JPH3 kodiert Junctophilin-3, ein membranüberbrückendes Protein, das junctionale Membrankomplexe stabilisiert, indem es die Plasmamembran an das endoplasmatische/sarkoplasmatische Retikulum koppelt. In Neuronen unterstützt Junctophilin-3 lokalisierte Ca²⁺-Mikrodomänen sowie die Erregungs‑Kontraktions‑ bzw. Erregungs‑Sekretionskopplung, indem es Kontaktstellen organisiert, die die Ca²⁺-Signalübertragung, die Membranerregbarkeit und die synaptische Funktion beeinflussen. Diese Prozesse überschneiden sich mit Signalwegen, die die intrazelluläre Calciumhomöostase, ER-Signalgebung und aktivitätsabhängige Antworten steuern. Eine Störung oder veränderte Expression von JPH3 wurde mit neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Huntington‑Krankheit‑ähnliche Erkrankung 2 (Huntington disease‑like 2), was JPH3 für die Untersuchung calciumabhängiger Vulnerabilität und neuronaler Fehlfunktionen relevant macht.

Das Junctophilin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des JPH3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des JPH3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von JPH3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Junctophilin-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von JPH3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Junctophilin-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf JPH3-Exone abzielen, die für die Junctophilin-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere JPH3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Junctophilin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Junctophilin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des JPH3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Junctophilin-3 HDR-Plasmid (h) und Junctophilin-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von JPH3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten JPH3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.