JMJD2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432966

Descripción general

Kdm4a codifica la desmetilasa de lisina de histonas del ratón JMJD2A (KDM4A), una enzima con dominio JmjC que elimina marcas de metilación represivas y activadoras en H3K9 y H3K36 para modular la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales. Al vincular el estado epigenético con procesos templados por el ADN, JMJD2A influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés replicativo y la estabilidad genómica, y se relaciona con vías que regulan la diferenciación y la transcripción sensible a hormonas. La actividad desregulada de la familia KDM4 se ha asociado con alteraciones en la señalización oncogénica, defectos en la reparación del ADN y expresión aberrante de genes del desarrollo, lo que convierte a Kdm4a en una diana habitual en estudios sobre mecanismos patológicos impulsados por la cromatina. En sistemas murinos, la perturbación de Kdm4a se utiliza con frecuencia para investigar cómo la dinámica de metilación de histonas coordina redes transcripcionales y la plasticidad celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO JMJD2A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kdm4a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kdm4a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kdm4a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína JMJD2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kdm4a para la investigación de la señalización de JMJD2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kdm4a críticos para la función de JMJD2A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kdm4a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido JMJD2A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido JMJD2A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kdm4a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR JMJD2A (m) y el plásmido HDR JMJD2A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kdm4a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kdm4a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.