JIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401634

概要

MAPK8IP1はJIP-1（JNK-interacting protein 1）をコードしており、JIP-1は神経細胞における足場（スキャフォールド）タンパク質として、MAP3K、MKK7、JNK（MAPK8）を協調的に配置することでMAPKモジュールを組織化し、ストレス応答性シグナル伝達の強度と局在を制御する。JIP-1は軸索輸送機構とも相互作用し、極性のある輸送や神経突起伸長に寄与することで、シグナル伝達を細胞骨格ダイナミクスやカーゴ輸送と結び付けている。JNK依存的な転写およびアポトーシスプログラムの調節を介して、MAPK8IP1は神経変性、神経損傷応答、代謝ストレス経路といった文脈で研究されてきた。JIP-1の足場機能が破綻するとキナーゼの特異性や下流遺伝子発現が変化し得るため、ヒト細胞モデルにおけるMAPK経路の配線（ネットワーク構造）を解明するうえで有用な結節点となる。

JIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAPK8IP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAPK8IP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAPK8IP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、JIP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、JIP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAPK8IP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• JIP-1の機能に不可欠なMAPK8IP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAPK8IP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• JIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびJIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAPK8IP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  JIP-1 HDRプラスミド（h）および JIP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAPK8IP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAPK8IP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。