ITF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402815

Übersicht

TCF4 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor ITF-2 (auch als E2-2 bekannt), einen DNA-bindenden Regulator, der durch Erkennung von E-Box-Motiven und Dimerisierung mit anderen bHLH-Proteinen lineagespezifische Genexpressionsprogramme moduliert. ITF-2 ist an transkriptionellen Netzwerken beteiligt, die zelluläre Differenzierung, Proliferation und Entwicklungs-Patterning steuern, und überschneidet sich mit Signalwegen, die Zellschicksalsentscheidungen und chromatinabhängige Genregulation prägen. Eine fehlregulierte TCF4-Aktivität wurde mit der Neuroentwicklungsbiologie und der Spezifizierung von Immunzellen in Verbindung gebracht, und eine veränderte Transkriptionskontrolle durch ITF-2 ist mit krankheitsrelevanten Phänotypen assoziiert, darunter Entwicklungsstörungen und eine mit Malignität verbundene transkriptionelle Umprogrammierung. Als kontextabhängiger Regulator wird TCF4 häufig hinsichtlich seiner Rolle bei der Kontrolle von Genexpressionsdynamik, Enhancer-Aktivität und nachgeschalteten Signalweg-Outputs in verschiedenen humanen Zellmodellen untersucht.

Das ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TCF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TCF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TCF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ITF-2/TCF4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TCF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ITF-2/TCF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TCF4-Exone abzielen, die für die ITF-2/TCF4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TCF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TCF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ITF-2/TCF4 HDR-Plasmid (h) und ITF-2/TCF4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TCF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TCF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.