Integrin α3/ITGA3/CD49c Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400841-ACT

ITGA3 codifica a integrina α3 (CD49c), uma subunidade α que forma o heterodímero α3β1 para mediar a adesão célula–matriz extracelular, particularmente às lamininas presentes nas membranas basais. Por meio do acoplamento a complexos de adesão focal, ITGA3 regula a remodelação do citoesqueleto, a polaridade celular e a migração direcional, integrando sinais das vias FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, que moldam programas de sobrevivência e motilidade. A integrina α3β1 também contribui para a organização epitelial e a integridade da barreira ao coordenar a sinalização dependente de adesão e o crosstalk com receptores de fatores de crescimento. A expressão desregulada de ITGA3 e a sinalização alterada de integrinas têm sido associadas a invasão anômala e comportamento metastático em múltiplos contextos de câncer, bem como a processos prejudicados de reparo epitelial em cenários inflamatórios e fibróticos.

Integrin α3/ITGA3/CD49c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α3/ITGA3/CD49c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α3/ITGA3/CD49c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α3/ITGA3/CD49c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α3/ITGA3/CD49c em células tumorais com expressão de ITGA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.