IMPACT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421126

Descripción general

IMPACT (dominio de inositol monofosfatasa que contiene 1) codifica una proteína citoplasmática conservada implicada en el control de la traducción y en la adaptación celular a la disponibilidad de nutrientes. En células de mamífero, IMPACT se ha relacionado con la modulación de la respuesta integrada al estrés, incluida la regulación de la vía de eIF2α y de programas de traducción inducidos por estrés que determinan la proliferación y la supervivencia bajo estrés metabólico. A través de estas conexiones, Impact se estudia en contextos en los que la proteostasis y la detección de aminoácidos influyen en la función neuronal, el desarrollo y la resiliencia al estrés, proporcionando un punto de entrada molecular para examinar cómo los puntos de control de la traducción contribuyen a fenotipos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IMPACT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Impact en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Impact junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Impact tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IMPACT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Impact para la investigación de la señalización de IMPACT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Impact críticos para la función de IMPACT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Impact para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IMPACT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IMPACT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Impact. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IMPACT (m) y el plásmido HDR IMPACT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Impact para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Impact definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.