IL-3Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421109
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- IL-3Rα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im IL-3Rα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-3Rα: sc-74522
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-3Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421109 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Il3ra kodiert die Alpha-Kette des Interleukin-3-Rezeptors (IL-3Rα, CD123), die die Ligandenbindungsspezifität vermittelt und zusammen mit der gemeinsamen Beta-Kette einen Signalkomplex bildet, um IL-3‑abhängige Signale weiterzuleiten. In hämatopoetischen und Immunzellen der Maus reguliert IL-3Rα Proliferation, Überleben und Differenzierung und aktiviert dabei nachgeschaltete JAK/STAT-, PI3K/AKT- und MAPK-Signalwege, die myeloide Linienantworten prägen. Eine veränderte IL-3Rα-Signalübertragung kann die zytokingesteuerte Homöostase sowie Entzündungsprogramme stören, was Il3ra zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Hämatopoese, myeloider Aktivierungszustände und des Cross-Talks zwischen Zytokinrezeptoren macht. Der Rezeptor wird außerdem häufig als Immunphänotypisierungsmarker verwendet, um Entwicklung und funktionelle Heterogenität in verschiedenen hämatopoetischen Kompartimenten zu analysieren.
Das IL-3Rα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Il3ra-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Il3ra-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Il3ra nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-3Rα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Il3ra-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-3Rα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Il3ra-Exone abzielen, die für die IL-3Rα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Il3ra-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom IL-3Rα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IL-3Rα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Il3ra-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-3Rα HDR-Plasmid (m) und IL-3Rα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Il3ra-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Il3ra-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.