IGFBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401076-ACT

IGFBP2 (proteina legante il fattore di crescita insulino-simile 2) è un regolatore secreto della segnalazione IGF che modula la biodisponibilità e l’interazione recettoriale di IGF-I e IGF-II, plasmando l’attività a valle delle vie PI3K/AKT e MAPK. Oltre al sequestro del ligando, IGFBP2 può influenzare le interazioni cellula–matrice e la migrazione tramite interazioni con componenti della matrice extracellulare e processi associati alle integrine, collegandosi così al controllo di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento. Un’alterata espressione di IGFBP2 è riportata in molteplici contesti patologici, in particolare in oncologia, dove è frequentemente associata a comportamento invasivo, adattamento metabolico e rimodellamento delle vie di segnalazione. In quanto effettore dipendente dal contesto all’interno delle reti di segnalazione dei fattori di crescita, IGFBP2 è ampiamente studiata come nodo molecolare che connette segnali extracellulari a programmi trascrizionali e fenotipici.

IGFBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGFBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGFBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGFBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGFBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGFBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGFBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGFBP2 nelle cellule tumorali con espressione di IGFBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.