IFN-β Double Nickaseプラスミド (h): sc-418564-NIC

IFNB1は、ヒトI型インターフェロンであるインターフェロンβ（IFN-β）をコードする遺伝子で、ウイルス感染や、RIG-I様受容体およびcGAS–STINGといったパターン認識受容体による核酸検知に応答して分泌されます。IFN-βはIFNAR受容体を介してシグナルを伝達し、JAK–STAT経路を活性化してインターフェロン刺激遺伝子（ISG）を誘導します。これらの遺伝子群は、抗ウイルス制限、抗原提示、ならびに自然免疫と獲得免疫のクロストークを形成します。このプログラムは細胞内在性のストレス応答やサイトカインネットワークにも影響し、その破綻は異常な炎症性シグナルや宿主防御の変調と関連します。そのため、IFNB1/IFN-βの生物学は、感染症、インターフェロン病、免疫介在性病態のモデルにおいて、上流のセンシング機構と下流の転写応答を解明する目的で頻繁に解析されています。

IFN-β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IFNB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IFNB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IFNB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IFNB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。