IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-428653

概要

Ifitm5は、インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質5（IFITM5）をコードしており、骨芽細胞系譜の細胞で発現が非常に限定された小型の膜関連タンパク質で、骨格の石灰化において重要な役割を担います。IFITM5は骨芽細胞の分化と細胞外マトリックスの沈着に寄与し、骨の発生およびリモデリングの過程で、コラーゲンの組織化やハイドロキシアパタイト形成などに影響を及ぼします。IFITM5の遺伝学的な異常は骨マトリックス性状の異常と関連し、骨形成不全症様の表現型とも関連付けられていることから、骨脆弱性やミネラル蓄積不全の研究において重要です。マウスモデルでは、Ifitm5は、骨の質を制御し、発生シグナルや炎症性シグナルへの応答を担う骨芽細胞内因性の経路を解明するための、取り組みやすい入口となります。

IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIfitm5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ifitm5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ifitm5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IFITM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IFITM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ifitm5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IFITM5の機能に不可欠なIfitm5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ifitm5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ifitm5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IFITM5 HDRプラスミド（m）および IFITM5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIfitm5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIfitm5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。