Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (m): sc-428653

Présentation

Ifitm5 code la protéine transmembranaire 5 induite par l’interféron (IFITM5), une petite protéine associée à la membrane dont l’expression est très restreinte aux cellules de la lignée ostéoblastique et qui joue un rôle clé dans la minéralisation du squelette. IFITM5 contribue à la différenciation des ostéoblastes et au dépôt de la matrice extracellulaire, en influençant des processus tels que l’organisation du collagène et la formation d’hydroxyapatite lors du développement osseux et du remodelage. Des altérations génétiques d’IFITM5 sont liées à des propriétés anormales de la matrice osseuse et ont été associées à des phénotypes d’ostéogenèse imparfaite, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fragilité osseuse et d’une minéralisation insuffisante. Dans des modèles murins, Ifitm5 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les voies intrinsèques aux ostéoblastes qui contrôlent la qualité osseuse et les réponses à des signaux développementaux et inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifitm5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifitm5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifitm5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFITM5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifitm5 pour l'étude de la signalisation de IFITM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifitm5 essentiels à la fonction de IFITM5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifitm5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFITM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFITM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifitm5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFITM5 plasmide HDR (m) et le IFITM5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifitm5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifitm5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.