IFIT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403830-ACT

A proteína induzida por interferon com repetições tetratricopeptídicas 2 (IFIT2) é um produto de um gene estimulado por interferon que se liga a RNAs virais e celulares e modula a tradução e a sinalização da imunidade inata. A IFIT2 participa de programas antivirais mediados por interferon tipo I e pela via JAK–STAT, influenciando o metabolismo de RNA, respostas ao estresse e vias apoptóticas durante a estimulação inflamatória. A expressão desregulada de IFIT2 tem sido observada em diversos contextos associados a infecção e inflamação e foi relacionada a assinaturas de interferon alteradas descritas na biologia de doenças autoimunes e em microambientes tumorais. Como um nó em redes reguladas por interferon, a IFIT2 é frequentemente utilizada como leitura da ativação imune inata e como ferramenta mecanística para estudar interações hospedeiro–patógeno e estados transcricionais induzidos por citocinas.

IFIT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFIT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFIT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFIT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFIT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFIT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFIT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFIT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFIT2 em células tumorais com expressão de IFIT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.