Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
IDE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421021
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IDE El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IDE, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IDE Anticuerpo (F-9): sc-393887
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IDE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421021 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La enzima degradadora de insulina (IDE) es una metaloproteasa de zinc que media la proteólisis intracelular y extracelular de la insulina y de otros péptidos pequeños, contribuyendo al recambio de péptidos y a la regulación de la duración de la señalización. En tejidos de ratón, la actividad de IDE se relaciona con la señalización de insulina/IGF, el tráfico endosomal y las vías de proteostasis que configuran la homeostasis metabólica y las respuestas al estrés. Las alteraciones en la expresión o la función de IDE se han vinculado con una regulación defectuosa del manejo de la glucosa y del aclaramiento de péptidos, y con frecuencia se investiga en modelos relevantes para fenotipos metabólicos y para la acumulación de péptidos asociada a la neurodegeneración. Como resultado, Ide es un nodo genético útil para analizar cómo la degradación de péptidos influye en las redes de señalización celular y en la biología de proteínas propensas a agregarse.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IDE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ide en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ide junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ide tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IDE.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ide para la investigación de la señalización de IDE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ide críticos para la función de IDE
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ide para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IDE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IDE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ide. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IDE (m) y el plásmido HDR IDE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ide para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ide definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.