Id1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400341-ACT

O gene humano **ID1** codifica a Id1, um regulador transcricional do tipo hélice–alça–hélice (HLH) que não possui domínio de ligação ao DNA e modula a expressão gênica ao sequestrar proteínas E e outros fatores bHLH. Ao restringir programas transcricionais específicos de linhagem, Id1 ajuda a controlar a proliferação, a diferenciação e a plasticidade celular, sendo frequentemente regulada a jusante da sinalização da família BMP/TGF-β e de redes transcricionais relacionadas, dependentes de SMAD. A atividade de ID1 está associada a estados de desenvolvimento e semelhantes aos de células-tronco, com funções dependentes do contexto na progressão do ciclo celular, na migração e nas respostas ao estresse. A expressão desregulada de ID1 é relatada em diversos modelos relevantes para doenças, nos quais alterações na diferenciação e no equilíbrio de sinalização podem contribuir para remodelamento tecidual aberrante e fenótipos oncogênicos.

Id1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ID1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Id1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ID1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ID1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Id1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ID1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Id1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Id1 em células tumorais com expressão de ID1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.