ICMT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406029

Descripción general

ICMT (isoprenilcisteína carboxil metiltransferasa) es una enzima localizada en el retículo endoplásmico que cataliza la metilesterificación de los residuos de cisteína prenilados en el extremo C-terminal de las proteínas CAAX tras la proteólisis, un paso terminal en la prenilación proteica. Esta modificación ajusta la asociación a membrana y el tráfico subcelular de pequeñas GTPasas y proteínas de señalización relacionadas, influyendo en vías como RAS/MAPK, PI3K–AKT y la regulación del citoesqueleto. Al regular la localización y la actividad de sustratos prenilados, ICMT contribuye al control del crecimiento celular, la polaridad y el transporte vesicular. Las alteraciones en la dinámica de la prenilación y el procesamiento dependiente de ICMT se han vinculado con la señalización oncogénica y otros trastornos en los que proteínas preniladas mal localizadas alteran la homeostasis celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ICMT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ICMT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ICMT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ICMT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ICMT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ICMT para la investigación de la señalización de ICMT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ICMT críticos para la función de ICMT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ICMT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ICMT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ICMT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ICMT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ICMT (h) y el plásmido HDR ICMT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ICMT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ICMT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.