I2PP2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400881

Übersicht

SET (auch als I2PP2A bekannt) kodiert ein multifunktionales nukleäres und zytoplasmatisches Protein, das die Proteinphosphatase 2A (PP2A) hemmt und dadurch die phosphorylierungsabhängige Kontrolle des Zellzyklusfortschritts, der Apoptose und transkriptioneller Programme beeinflusst. I2PP2A ist über Interaktionen mit Histonen und chromatinassoziierten Komplexen an der Chromatinregulation beteiligt und verknüpft SET damit mit DNA-Schadensantworten, Replikationsstress und der epigenetischen Modulation der Genexpression. Durch die Drosselung der PP2A-Aktivität kann SET zentrale Signalachsen wie MAPK/ERK und PI3K/AKT beeinflussen, die auf einen ausgewogenen Phosphorylierungsumsatz angewiesen sind. Eine dysregulierte SET-Expression oder -Aktivität wurde mit onkogenen Signalzuständen sowie neuroinflammatorischen oder neurodegenerativen Prozessen in Verbindung gebracht, was SET zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Phosphataseregulation und zu chromatinassoziierten Signalwegen macht.

Das I2PP2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SET-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SET-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SET nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die I2PP2A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SET-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der I2PP2A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SET-Exone abzielen, die für die I2PP2A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SET-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom I2PP2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom I2PP2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SET-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das I2PP2A HDR-Plasmid (h) und I2PP2A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SET-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SET-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.