HuC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400172

概要

ELAVL3（HuC）は、Hu/ELAVファミリーに属する神経細胞で高発現のRNA結合タンパク質で、AUリッチエレメントを認識し、発生期および成熟神経細胞におけるmRNAの安定性、スプライシング、局在、翻訳を制御します。神経分化、シナプス機能、神経突起伸長に関連する転写後プログラムを調節することで、ELAVL3は活動依存的な遺伝子発現と神経細胞の恒常性の形成に寄与します。ELAVファミリーによるRNAネットワークの制御異常は、神経発達および神経変性の過程と関連づけられており、ELAVL3は神経細胞同一性を研究するためのマーカー、ならびに機構解明の糸口として頻用されています。ELAVL3依存的なRNAレギュロンをマッピングすることは、ヒト神経モデルにおける興奮性、シナプス可塑性、ストレス応答に影響するRNA代謝経路の研究を後押しします。

HuC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるELAVL3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ELAVL3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ELAVL3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HuCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HuCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ELAVL3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HuCの機能に不可欠なELAVL3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ELAVL3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HuC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHuC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ELAVL3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HuC HDRプラスミド（h）および HuC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはELAVL3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のELAVL3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。