Plasmide CRISPR/Cas9 KO HuC (h): sc-400172

Présentation

ELAVL3 (HuC) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, appartenant à la famille Hu/ELAV, qui reconnaît les éléments riches en AU et régule la stabilité, l’épissage, la localisation et la traduction des ARNm dans les neurones en développement et matures. En contrôlant des programmes post-transcriptionnels liés à la différenciation neuronale, à la fonction synaptique et à la croissance des neurites, ELAVL3 contribue à façonner l’expression génique dépendante de l’activité et l’homéostasie neuronale. Une régulation altérée des réseaux d’ARN de la famille ELAV a été associée à des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et ELAVL3 est fréquemment utilisé comme marqueur et comme point d’entrée mécanistique pour étudier l’identité neuronale. La cartographie des régulons d’ARN dépendants d’ELAVL3 soutient la recherche sur les voies du métabolisme de l’ARN qui influencent l’excitabilité, la plasticité synaptique et les réponses au stress dans des modèles neuronaux humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HuC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELAVL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELAVL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELAVL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HuC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELAVL3 pour l'étude de la signalisation de HuC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELAVL3 essentiels à la fonction de HuC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELAVL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HuC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HuC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELAVL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HuC plasmide HDR (h) et le HuC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELAVL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELAVL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.