Plasmide CRISPR/Cas9 KO HuB (h): sc-400169

Présentation

ELAVL2 (HuB) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, appartenant à la famille ELAV/Hu, qui reconnaît des éléments riches en AU afin de réguler le traitement des pré-ARNm, la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. En façonnant des programmes d’expression génique post-transcriptionnelle, HuB contribue à la différenciation neuronale, au développement synaptique et à la plasticité dépendante de l’activité, via le contrôle de transcrits impliqués dans la neurogenèse et la dynamique du cytosquelette. Les régulons d’ARN associés à ELAVL2 recoupent des voies qui gouvernent la spécification du destin cellulaire et les réponses au stress, et des profils d’expression altérés ont été rapportés dans des contextes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, ainsi que dans certaines tumeurs du système nerveux. Ces caractéristiques font d’ELAVL2 un nœud utile pour disséquer la manière dont le métabolisme de l’ARN influence l’identité neuronale et la dysfonction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HuB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELAVL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELAVL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELAVL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HuB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELAVL2 pour l'étude de la signalisation de HuB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELAVL2 essentiels à la fonction de HuB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELAVL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HuB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HuB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELAVL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HuB plasmide HDR (h) et le HuB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELAVL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELAVL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.