HSF1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400432-LAC

Humanes HSF1 (Heat-Shock-Faktor 1) ist ein zentraler transkriptioneller Masterregulator des Proteostase-Netzwerks, der die zelluläre Anpassung an proteotoxischen Stress koordiniert. Nach stressinduzierter Trimerisierung und Anreicherung im Zellkern bindet HSF1 an Heat-Shock-Elemente und induziert Chaperone und Ko‑Chaperone wie HSP70 und HSP90. Dadurch verknüpft es die Kapazität der Proteinfaltung mit der Ubiquitin-Proteasom-Aktivität, der Autophagie und der Wiederherstellung der Proteinhomöostase. Über akute Stressantworten hinaus integriert HSF1 Signale aus den mTOR- und MAPK-Signalwegen und beeinflusst so die Kontrolle des Zellzyklus, die Resistenz gegen Apoptose und die metabolische Umprogrammierung. Eine fehlregulierte HSF1-Aktivität wurde mit Neurodegeneration, entzündlichen Stressphänotypen und onkogenen Programmen in Verbindung gebracht, die das Überleben von Tumorzellen unter chronischem proteotoxischem Stress unterstützen, wodurch HSF1 ein wichtiger Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stresssignalgebung ist.

HSF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSF1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HSF1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSF1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HSF1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSF1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.