HS3ST5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-415157
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HS3ST5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HS3ST5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HS3ST5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-415157 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
HS3ST5 codifica la heparán sulfato–glucosamina 3-O-sulfotransferasa 5, una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza la 3-O-sulfatación de residuos de glucosamina durante la biosíntesis de proteoglucanos de heparán sulfato. Esta modificación ayuda a definir la estructura fina del heparán sulfato, modelando propiedades de unión a ligandos que influyen en la comunicación célula–célula, la adhesión y la distribución de morfógenos dentro de la matriz extracelular. Al modular interacciones dependientes del heparán sulfato, HS3ST5 puede afectar vías de señalización como las redes de FGF, Wnt, Hedgehog y quimiocinas, que regulan el desarrollo y la homeostasis tisular. Los patrones desregulados de sulfatación del heparán sulfato se han vinculado con cambios en la disponibilidad de factores de crecimiento, inflamación y remodelación del microambiente tumoral, lo que hace que HS3ST5 sea relevante para estudios mecanísticos de cambios en glicosaminoglucanos asociados a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HS3ST5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HS3ST5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HS3ST5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HS3ST5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HS3ST5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HS3ST5 para la investigación de la señalización de HS3ST5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HS3ST5 críticos para la función de HS3ST5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HS3ST5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HS3ST5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HS3ST5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HS3ST5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HS3ST5 (h) y el plásmido HDR HS3ST5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HS3ST5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HS3ST5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.